黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒

本试剂盒采用固相酶联免疫吸附ELISA原理，通过黄曲霉毒素B1(AFB1)抗原和曲霉毒素B1(AFB1)抗体，待测抗原的竞争免疫反应，以及酶的催化显色反应来检测AFB1，优点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判读，适用于食品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测。  

 

试剂盒灵敏度：0.1 ppb

回收率：  谷物/饲料中AFB1回收率   95%±15%

变异系数：批内变异系数<10%，批间变异系数<15%。

 

1．微量测试孔：  96T/8孔

2．标 准 液×6瓶：（1 mL/瓶） 0 ppb  0.05 ppb  0.15 ppb  0.45 ppb  1.35 ppb  4.05 ppb

3．抗体工作液                 7 mL

3．酶标记物                  12 mL

4．底物缓冲液                 7 mL 

5．底物液　                   7 mL 

6．终止液                     7 mL

7．20倍浓缩洗涤液            50 mL   加蒸馏水后稀释到1000 mL。

 

实验准备：配制60 %甲醇水溶液（v/v，60：40）和20 %甲醇水溶液（v/v，20：80）。

1 . 脂肪含量低的固体样品（如大米、玉米、小麦和饲料等）

1、称取5 g 粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。

2、将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3 min后，用滤纸过滤，收集滤液。

3、取滤液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。

2．酱油、醋

1、称取5 g样品于25 mL小烧杯中，用10 mL蒸馏水将试样转移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。

2、放出下层三氯甲烷层，取5 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。

3．食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）

1、称5 g油样于25 mL小烧杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次将试样转移至125 mL分液漏斗中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞轻轻振摇5 min，静置分层，放出下层60%甲醇水提取液。

2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。

4．酒类

1、称取5 g样品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。

2、放出下层三氯甲烷层，取5 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。

5．花生

1、样品去壳粉碎，称取5 g于100 mL具塞三角瓶中。加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚），振摇10 min，用whatman 1号滤纸过滤。

2、收集滤液于125 mL分液漏斗中，静置分层后放出下层60%甲醇水提取液。

3、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，再用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。

6．月饼、桃酥、花生酱等

1、称取5 g粉碎样品于125 mL具塞三角瓶中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷（或石油醚）加塞震荡10 min，过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层。

2、待下层甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一三角瓶中。吸取10 mL甲醇水提取液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，取10 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。

7．面粉、饲料浓缩料

1、称取5 g样品于125 mL具塞三角瓶中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液加塞震荡10 min，过滤，收集滤液。

2、吸取10 mL滤液于125 mL分液漏斗中，加入20 mL三氯甲烷，加塞振摇3 min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，取10 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。

 

注意：

1、某些样品待检液(如花生等)久置会影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。

2、 若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8 ℃避光保存。

3、 试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室内温度（20-25 ℃）进行温度平衡；试剂用完后立即将其放置回2-8 ℃冰箱内保存。

4、 在每个步骤操作时，速度要快，不要将板孔暴露在空气中时间过久，避免酶标板变干。未用完的酶标板需密闭于自封带内，防止受潮且避光保存于2-8 ℃冰箱内。

5、 温育时，需避光，建议将酶标板置于湿盒内(在有盖容器内放置一块平整湿纱布)进行温育。