呋喃妥因ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AHD，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的AHD和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的AHD含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物含量。

 

试剂盒灵敏度：          0.1 ppb

组织、蜂蜜              0.2 ppb

鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb

鱼/虾水产组织               90%±15%

蜂蜜/鸡肉/肝脏样本           80%±15%

呋喃妥因代谢物            

呋喃唑酮代谢物            ﹤0.1%

呋喃它酮代谢物            ﹤0.1%

呋喃西林代谢物            ﹤0.1%

 

1．微量测试孔：96T/8孔

2．标准品液： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1.0 ml/瓶）

3．酶标记物            12 mL

4．抗体工作液           7 mL

5．底物缓冲液           7 mL

6．底物液               7 mL

7．终止液               7 mL

8．20倍浓缩洗涤液      50 mL

9．复溶液               50 mL

10．15.1 mg衍生化试剂

 

仪器：微孔酶标仪、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g） 各种量程微量移液器

试剂：甲醇、氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛、亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）、ZnSO4·7H2O

 

处理任何样本时，都必须注意：

1、实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

2、实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

1、衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)

2、C液：（供奶样用）称12.5 g 亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。

3、D液：（供奶样用）称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。

4、0.1 MK2HPO4 称22.8 g K2HPO4·3H2O加去离子水溶解定溶至1000 mL

5、1 M HCl  取8.6 mL浓HCl加水定溶至100 mL。

6、1 M NaOH 称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。

（a）鱼虾和肉样

用均质器均质样本，接(d)的描述方法。

（b）奶样

1、取出5 mL的样本到玻璃离心管中，分别加入C液和D液各250 µL；

2.、用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min,4-12 ℃。如果没有恒温离心机，则先将样本降温至大约8 ℃，然后离心；

3、接(d)的描述方法

（c）蜂蜜

1、取1 g样本到离心管中；

2、加入4 mL的蒸馏水振荡溶解，0.5 mL 1 M HCL和100 µL衍生化试剂，充分振荡；

3、接(d)第2步描述方法。

（d）接上面的方法

1、 取1±0.05 g的均质物（鱼虾/肉样）、牛奶的离心上清液1.1 mL（相当于1 mL的奶样），分别加入4 mL的蒸馏水,0.5 mL 1 M HCL和100 µL衍生化试剂，充分振荡；

2.、在56 ℃过夜孵育（2 h）；

3、 分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4 ，0.4 mL 1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，剧烈振荡30 s；

4、 在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min；

5、 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一个容器中于50 ℃氮气/空气吹干。

6、 用1 mL正己烷溶解干燥物，用1 mL已稀释好的复溶液充分混合；在室温下   （20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min；

7、 取50 µL下层用于分析。

样本稀释倍数：2