氯丙嗪ELISA试剂盒

1. 测定原理

氯丙嗪检测试剂盒是利用免疫学直接竞争法的原理，固相载体微孔板上包被有氯丙嗪蛋白偶联物，加入待测氯丙嗪标准品或样品溶液及氯丙嗪的抗体，包被在微孔板上的氯丙嗪蛋白偶联物和标准品或样品中的氯丙嗪竞争性地与抗体结合，形成抗原抗体复合物；洗涤后再加入二抗，洗涤后加入显色剂，将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的氯丙嗪浓度与吸收光强度成反比。

 

2. 试剂盒组成

（1）96孔酶标板：     1块 96 T/8孔
（2）标准品：      0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1ppb（1mL/瓶）

（3）抗体工作液：      1瓶（7mL）
（3） 酶标记物：       1瓶（12mL）
（4）底物缓冲液：      1瓶（7mL）
（5）底物液：          1瓶（7mL）
（6）终止液：          1瓶（7mL）
（7）20倍浓缩洗涤液：  1瓶（50mL）， 加蒸馏水稀释到1000 mL 

（8）复溶液（浓缩）：   1瓶（15ml），加蒸馏水稀释至300ml

（9）使用说明书        1 份

（10）封板膜：          2张

（11）封口袋：         1 个

 

3. 注意事项 

（1）终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

（2）不要使用过了有效日期的氯丙嗪检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。

（3）0标准品的A450nm<0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。

（4）显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。

 

4. 储存条件

（1） 2-8℃保存，切勿冷冻。

（2）将不用的酶标板放进带干燥剂的封口袋中密封保存。

（3） 酶标记物和显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

 

5. 样品处理

（1） 尿样

取新鲜干净的尿样50 μL进行分析。
 （2）组织、肌肉样品 （稀释倍数为1）

a．取1g±0.05 g组织，加入6 mL乙腈，振荡10 min,室温4000 r/min以上离心10 min；

b．取全部上清置于离心管中；在残渣中再加入4ml乙腈，振荡10 min，室温4000 r/min以上离心10min。

c．混合两次上清液，振荡1min，于50 ℃下氮气或室温下吹风机吹干；

d．加入1 mL配好的复溶液，取50 μL进行分析。

 

6. 免疫分析时试剂的准备

（1） 注意事项

a) 使用之前将所有试剂回升至室温。
b) 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
c) 在使用中不要让微孔干燥。
d) 在EIA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。
e) 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

（2） 浓缩洗涤液使用前应根据所需量进行20倍稀释，即按1 mL浓缩洗涤液加入19 mL蒸馏水的比例进行稀释。

（3） 复溶液为浓缩溶液，使用前应根据需要量进行20倍稀释，即按1 mL浓缩洗涤液加入19 mL蒸馏水的比例进行稀释。

 

7. 测定程序

（1） 将标准品、样品所需微孔板（均需2个平行试验）放在反应架上。
（2） 加入50 μL样品或标准品到微孔板中，再加入50 μL抗体工作液到微孔板中，充分振荡混匀，用盖板膜盖板后，37℃下反应30 min 。
（3） 弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩洗液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。

（4）加入100 μL酶标记物到微孔板中，用盖板膜盖板后，37℃下反应20 min 。

（5）弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩洗液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。
（6）加入50 μL底物液缓冲液，再加入50 μL底物液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后在37℃下暗处孵育10min。
（7）加入50 μL终止液到微孔板中，混合好在450 nm处测量吸光度值，必须在加入终止液后15分钟内读取光度值。