呋喃西林ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的SEM，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的SEM和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃西林代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的SEM含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃西林代谢物含量。

 

试剂盒灵敏度：  0.1 ppb

样本检测下限：

组织、蜂蜜       0.2 ppb

鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb

鱼/虾水产组织         85%±10%

蜂蜜/鸡肉/肝脏样本    75%±15%

呋喃西林代谢物        

呋喃它酮代谢物       ﹤0.1%

呋喃妥因代谢物       ﹤0.1%

呋喃唑酮代谢物       ﹤0.1%

 

1．微量测试孔：    96T/8孔

2．标准液：        0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb （1ml/瓶）

3．酶标记物：        12 mL

4．抗体浓缩液：       7 mL

5．底物缓冲液：       7 mL

6．底物液：           7 mL

7．终止液：           7 mL

8．20倍浓缩洗涤液 ：50 mL

  9．复溶液：          50 mL

 10．15.1 mg衍生化试剂

 

具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01 g）

微量移液器：单道20 µL-200 µL，100 µL-1000 µL、多道250 µL

试       剂：氢氧化钠、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、甲醇、乙酸乙酯、亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）ZnSO4·7H2O

 

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

1．衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)

2．C液：（供奶样用）称12.5 g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。

        D液：（供奶样用）称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。

3．0.1 MK2HPO4 称22.8 g K2HPO4·3H2O    加去离子水溶解定溶至1 L

4．1 M HCl取8.6 mL浓HCl加水定溶至100 mL。

5．1 M NaOH称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。

 

(a) 肉样或鱼虾

用均质器均质样本,接（d）的描述方法

 

(b) 奶样

1．取出5 mL的奶样本到玻璃离心管中，分别加入C液和D液各250 µL。

2．用振荡器充分混合样本，用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min(4-12 ℃).若没有恒温离心机，则先将样本降温至大约8 ℃,然后离心。

3．接(d)的描述方法。

 

(c) 蜂蜜 

1．取1±0.05 g样本到离心管中。

2．加入4 mL的去离子水溶解,再加入0.5 mL1 M HCl和100 µL衍生化试剂,充分振荡。

3．接(d)第2步描述方法。

 

1．取1±0.05 g的均质样本(肉样/鱼虾)、牛奶的离心上清液1.1 mL（相当1 mL奶样），分别加入4 mL的去离子水，0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化试剂，充分振荡。

2．置于56 ℃过夜孵育（大约2 h）。

3．分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4，0.4 mL 1M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，充分振荡30 s；

4．在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min。

5．取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50 ℃氮气/空气吹干。

  6．用1 mL正己烷溶解干燥物，用1mL已稀释好的复溶液充分混合；在室温下（20-25 ℃） 4000 r/min以上离心10 min。

7．取50 µL下层相用于分析。

 

 

 

1．将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。

3．加标准品/样本50 µL /孔，然后加入抗体工作液50 µL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，室温反应30 min。

4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

5．加入酶标记物100µl /孔，用封板膜盖板，室温反应20 min。

6．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

7．显色：每孔加入底物缓冲液50 µL，再加底物液50 µL，轻轻振荡混匀，室温环境避光显色10 min。

8．测定：每孔加入终止液50µL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。