呋喃西林ELISA试剂盒
更新时间:2014-11-04 10:14:48 信息编号:2108996 发布者IP:58.240.164.83 浏览:203次- 供应商
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产品详细介绍
一、 原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的SEM,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的,样本中的SEM和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃西林代谢物的衍生物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样品中的SEM含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出呋喃西林代谢物含量。
二、 试剂盒技术指标:
试剂盒灵敏度: 0.1 ppb
样本检测下限:
组织、蜂蜜 0.2 ppb
鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰,检测下限为0.3 ppb
回收率:
鱼/虾水产组织
85%±10%
蜂蜜/鸡肉/肝脏样本 75%±15%
交叉反应率:
呋喃西林代谢物
呋喃它酮代谢物 ﹤0.1%
呋喃妥因代谢物 ﹤0.1%
呋喃唑酮代谢物 ﹤0.1%
三、试剂盒组成
1.微量测试孔: 96T/8孔
2.标准液: 0 ppb、0.1
ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb (1ml/瓶)
3.酶标记物: 12 mL
4.抗体浓缩液: 7 mL
5.底物缓冲液: 7 mL
6.底物液:
7 mL
7.终止液:
7 mL
8.20倍浓缩洗涤液 :50 mL
9.复溶液:
50 mL
10.15.1 mg衍生化试剂
四、 所用仪器、试剂
具备的仪器:微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01 g)
微量移液器:单道20 µL-200 µL,100 µL-1000 µL、多道250 µL
试
剂:氢氧化钠、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、甲醇、乙酸乙酯、亚硝基铁氰化钾(K2Fe(CN)5·NO·3H2O)ZnSO4·7H2O
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制:
1.衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)
2.C液:(供奶样用)称12.5 g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。
D液:(供奶样用)称29.8 g
硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。
3.0.1 MK2HPO4 称22.8 g
K2HPO4·3H2O
加去离子水溶解定溶至1 L
4.1 M HCl取8.6 mL浓HCl加水定溶至100 mL。
5.1 M NaOH称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
样本的处理
(a) 肉样或鱼虾
用均质器均质样本,接(d)的描述方法
(b) 奶样
1.取出5 mL的奶样本到玻璃离心管中,分别加入C液和D液各250 µL。
2.用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min(4-12
℃).若没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8 ℃,然后离心。
3.接(d)的描述方法。
(c) 蜂蜜
1.取1±0.05 g样本到离心管中。
2.加入4 mL的去离子水溶解,再加入0.5 mL1 M HCl和100 µL衍生化试剂,充分振荡。
3.接(d)第2步描述方法。
(d)接上面的方法
1.取1±0.05 g的均质样本(肉样/鱼虾)、牛奶的离心上清液1.1 mL(相当1 mL奶样),分别加入4
mL的去离子水,0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化试剂,充分振荡。
2.置于56 ℃过夜孵育(大约2 h)。
3.分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4,0.4 mL 1M NaOH和5
mL的乙酸乙酯,充分振荡30 s;
4.在室温下(20-25 ℃)4000 r/min以上离心10 min。
5.取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50 ℃氮气/空气吹干。
6.用1 mL正己烷溶解干燥物,用1mL已稀释好的复溶液充分混合;在室温下(20-25 ℃) 4000
r/min以上离心10 min。
7.取50 µL下层相用于分析。
样本稀释倍数:2
六、实验操作步骤
1.将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25 ℃)平衡30 min以上,
注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2.按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔板重新密封,保存于2-8 ℃,不要冷冻。
3.加标准品/样本50 µL /孔,然后加入抗体工作液50 µL/孔,再振荡混匀,用封板膜盖板,室温反应30
min。
4.洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。
5.加入酶标记物100µl /孔,用封板膜盖板,室温反应20 min。
6.洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。
7.显色:每孔加入底物缓冲液50 µL,再加底物液50 µL,轻轻振荡混匀,室温环境避光显色10 min。
8.测定:每孔加入终止液50µL,轻轻振荡匀,设定酶标仪于450 nm处(在20
min内读完数据),测定吸光度值。