呋喃妥因ELISA试剂盒
更新时间:2014-11-04 10:14:42 信息编号:2108999 发布者IP:58.240.164.83 浏览:168次- 供应商
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产品详细介绍
一、 原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AHD,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的,样本中的AHD和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样品中的AHD含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物含量。
二、 试剂盒技术指标:
试剂盒灵敏度:
0.1 ppb
样本检测下限:
组织、蜂蜜
0.2 ppb
鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰,检测下限为0.3 ppb
回收率:
鱼/虾水产组织
90%±15%
蜂蜜/鸡肉/肝脏样本
80%±15%
交叉反应率:
呋喃妥因代谢物
呋喃唑酮代谢物
﹤0.1%
呋喃它酮代谢物
﹤0.1%
呋喃西林代谢物
﹤0.1%
三、试剂盒组成
1.微量测试孔:96T/8孔
2.标准品液: 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb(1.0
ml/瓶)
3.酶标记物
12 mL
4.抗体工作液
7 mL
5.底物缓冲液
7 mL
6.底物液
7 mL
7.终止液
7 mL
8.20倍浓缩洗涤液 50 mL
9.复溶液
50 mL
10.15.1 mg衍生化试剂
四、 所用仪器、试剂
仪器:微孔酶标仪、振荡器、离心机、天平(感量0.01 g) 各种量程微量移液器
试剂:甲醇、氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛、亚硝基铁氰化钾(K2Fe(CN)5·NO·3H2O)、ZnSO4·7H2O
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
1、实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
2、实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制:
1、衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)
2、C液:(供奶样用)称12.5 g 亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。
3、D液:(供奶样用)称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。
4、0.1 MK2HPO4 称22.8 g
K2HPO4·3H2O加去离子水溶解定溶至1000 mL
5、1 M HCl 取8.6 mL浓HCl加水定溶至100 mL。
6、1 M NaOH 称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
样本的处理
(a)鱼虾和肉样
用均质器均质样本,接(d)的描述方法。
(b)奶样
1、取出5 mL的样本到玻璃离心管中,分别加入C液和D液各250 µL;
2.、用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min,4-12
℃。如果没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8 ℃,然后离心;
3、接(d)的描述方法
(c)蜂蜜
1、取1 g样本到离心管中;
2、加入4 mL的蒸馏水振荡溶解,0.5 mL 1 M HCL和100 µL衍生化试剂,充分振荡;
3、接(d)第2步描述方法。
(d)接上面的方法
1、 取1±0.05 g的均质物(鱼虾/肉样)、牛奶的离心上清液1.1 mL(相当于1 mL的奶样),分别加入4
mL的蒸馏水,0.5 mL 1 M HCL和100 µL衍生化试剂,充分振荡;
2.、在56 ℃过夜孵育(2 h);
3、 分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4 ,0.4 mL 1 M
NaOH和5 mL的乙酸乙酯,剧烈振荡30 s;
4、 在室温下(20-25 ℃)4000 r/min以上离心10 min;
5、 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一个容器中于50 ℃氮气/空气吹干。
6、 用1 mL正己烷溶解干燥物,用1 mL已稀释好的复溶液充分混合;在室温下 (20-25
℃)4000 r/min以上离心10 min;
7、 取50 µL下层用于分析。
样本稀释倍数:2