大肠菌群测试盒(单料型)使用说明
(gb/t4789.3-2008第一法大肠菌群mpn计数)
准备测试盒
●.排气泡:将测试盒前后分别以大约45度角倾斜,必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下,以排除产气窗内气泡;并将样品编号填写在盒盖上;
●开口:将测试盒平放在桌面上,左手揭开活动盒盖,右手持经火焰消毒并冷却了的专用开口器,
在测试盒每管中间位置连续穿刺开口;
样品的稀释
1.固体或半固体样品:称取25g样品,放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1
min~2min,或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1
min~2min,制成1:10的样品匀液。
2.液态样品:用无菌吸管吸取25ml样品,置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。
3.
样品匀液的ph值应在6.5~7.5之间,必要时分别用1mol/l氢氧化钠(naoh)或1mol/l盐酸(hcl)调节。
4.
用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:100的稀释液。
5.
根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制作10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min.
初发酵试验
固体样品
1:10的匀液1ml三管、1:100的匀液1ml三管、1:1000的匀液1ml三管、采用单料型大肠菌群测试盒;;操作方法如下:
前排三大管内接种1:10的样品匀液各1ml,后排共六管,其中三管接种1:100的样品匀液各1ml,另外三管接种1:1000的样品匀液各1ml,将接种好的测试盒放入托盘内,置36±1℃培养箱内,培养48±2h后,产气窗内无气泡者,为大肠菌群阴性,如产气窗内有气泡者,则进行复发酵试验。
据阳性管数查得大肠菌群Zui可能数(mpn)检索表的实际数值报告结果
液体样品(一般情况下有如下两种接种方式):
a、原液1ml三管、1:10的样品匀液1ml三管、1:100的样品匀液1ml三管;操作方法如下:
前排三大管内接种原液各1
ml,后排共六管,其中三管接种1:10样品匀液各1ml,另外三管接种1:100的样品匀液各1ml,将接种好的测试盒放入托盘内,置36±1℃培养箱内,培养48±2h后,产气窗内无气泡者,为大肠菌群阴性,如产气窗内有气泡者,则进行复发酵试验。
据阳性管数查得大肠菌群Zui可能数(mpn)检索表的实际数值除以10报告结果;
b、1:10的样品匀液1ml三管、1:100的样品匀液1ml三管、1:1000的样品匀液1ml三管;操作方法如下:
前排三大管内接种1:10的样品匀液各1ml,后排共六管,其中三管接种1:100样品匀液各1ml,另外三管接种1:1000的样品匀液各1ml;将接种好的测试盒放入托盘内,置36±1℃培养箱内,培养48±2h后,产气窗内无气泡者,为大肠菌群阴性,如产气窗内有气泡者,则进行复发酵试验。
据阳性管数查得大肠菌群Zui可能数(mpn)检索表的实际数值报告结果.
复发酵试验
用接种针从所有48±2h
内发酵产气的lst肉汤管中分别取培养物两针移种于煌绿乳糖胆盐(bglb)肉汤管中,置36±1℃培养箱内,培养24±2h后,观察产气情况,产气者计为大肠菌群阳性管;没产气者,继续培养培养24±2h,产气者计为大肠菌群阳性管;没产气者为阴性管;
注意事项:
●在培养箱内拿出装有测试盒的托盘以及观察结果时,应平拿平放,以免由于测试盒的倾向而将阳性管产气窗内气泡排出,而影响结果.
(附注:因食品卫生评价标准没变动,为使检测结果在进行评价时能转化为与之相对应的数值,固体样品只能采用双料型测试盒;液体样品可以采用双料型测试盒;也可以采用单料型测试盒;此仅供参考,各单位根据具体情况,灵活掌握)