大肠菌群测试盒（单料型）使用说明
（gb/t4789.3-2008第一法大肠菌群mpn计数）
准备测试盒
●.排气泡：将测试盒前后分别以大约45度角倾斜，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下，以排除产气窗内气泡；并将样品编号填写在盒盖上；
●开口：将测试盒平放在桌面上，左手揭开活动盒盖，右手持经火焰消毒并冷却了的专用开口器,
在测试盒每管中间位置连续穿刺开口；
样品的稀释
1.固体或半固体样品：称取25g样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1
min～2min，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1
min～2min，制成1：10的样品匀液。
2.液态样品：用无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。
3.
样品匀液的ph值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/l氢氧化钠（naoh）或1mol/l盐酸（hcl）调节。
4.
用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的稀释液。
5.
根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制作10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min.
初发酵试验
固体样品
1：10的匀液1ml三管、1：100的匀液1ml三管、1：1000的匀液1ml三管、采用单料型大肠菌群测试盒；；操作方法如下：
前排三大管内接种1：10的样品匀液各1ml，后排共六管，其中三管接种1：100的样品匀液各1ml，另外三管接种1：1000的样品匀液各1ml，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃培养箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。
据阳性管数查得大肠菌群Zui可能数（mpn）检索表的实际数值报告结果
液体样品（一般情况下有如下两种接种方式）：
a、原液1ml三管、1：10的样品匀液1ml三管、1：100的样品匀液1ml三管；操作方法如下：
前排三大管内接种原液各1
ml，后排共六管，其中三管接种1：10样品匀液各1ml，另外三管接种1：100的样品匀液各1ml，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃培养箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。
据阳性管数查得大肠菌群Zui可能数（mpn）检索表的实际数值除以10报告结果；
b、1：10的样品匀液1ml三管、1：100的样品匀液1ml三管、1：1000的样品匀液1ml三管；操作方法如下：
前排三大管内接种1：10的样品匀液各1ml，后排共六管，其中三管接种1：100样品匀液各1ml，另外三管接种1：1000的样品匀液各1ml；将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃培养箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。
据阳性管数查得大肠菌群Zui可能数（mpn）检索表的实际数值报告结果.
复发酵试验
用接种针从所有48±2h
内发酵产气的lst肉汤管中分别取培养物两针移种于煌绿乳糖胆盐（bglb）肉汤管中，置36±1℃培养箱内，培养24±2h后，观察产气情况，产气者计为大肠菌群阳性管；没产气者，继续培养培养24±2h，产气者计为大肠菌群阳性管；没产气者为阴性管；
注意事项：
●在培养箱内拿出装有测试盒的托盘以及观察结果时，应平拿平放，以免由于测试盒的倾向而将阳性管产气窗内气泡排出，而影响结果.
（附注：因食品卫生评价标准没变动，为使检测结果在进行评价时能转化为与之相对应的数值，固体样品只能采用双料型测试盒；液体样品可以采用双料型测试盒；也可以采用单料型测试盒；此仅供参考，各单位根据具体情况，灵活掌握）
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