CRISPR Cas9基因敲除服务
更新时间:2015-07-09 14:07:39 信息编号:3731187 发布者IP:221.204.167.185 浏览:234次- 供应商
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产品详细介绍
CRISPR/Cas9/gRNA(CRISPR-Cas RNA-gudide nuclease)基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破。与TALEN和ZNF技术相比,CRISPR/Cas9系统的载体构建和使用更加方便。基因敲除的特异性由gRNA而不是蛋白来确定,因此避免了复杂的质粒组装构建过程,甚至使同时敲除多个基因成为可能。不仅如此,实验表明CRISPR/Cas9系统的基因敲除效率与TALEN、ZNF的效率相当或者更好。目前Cas9的特异性及其它一些特性尚有待进一步研究,但由于其操作极其简便,该技术的应用将大大简化育种,遗传变异修复,及各种基因研究的工作难度。
我们现提供Cas9/gRNA基因敲除产品:
Cas9/gRNA基因敲除-质粒转染表达系统 Cas9/gRNA基因敲除-慢病毒表达系统 Cas9稳定表达细胞系
Cas9/gRNA基因敲除相关服务:
Cas9/gRNA基因敲除载体构建服务 基因敲除细胞系构建服务
CRISPR/Cas9系统基因敲除原理
CRISPR (clustered, regularly
interspaced, short palindromic
repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中,Cas蛋白(CRISP-associated
protein)含有两个核酸酶结构域,可以分别切割两条DNA链。一旦与crRNA(CRISPR
RNA)和tracrRNA结合形成复合物,Cas蛋白中的核酸酶即可对与复合物结合的DNA进行切割。切割后DNA双链断裂从而使入侵的外源DNA降解。
1、Cas9蛋白
来自Streptococcus pyogenes
的Cas9由于PAM识别序列仅为2个碱基(GG),几乎可以在所有的基因中找到大量靶点,因此得到广泛的应用。Cas9蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性,包括细菌、酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别RNA(gRNA)可以通过载体表达或者化学合成后与Cas9蛋白共同进入细胞,对特异DNA序列剪切,从而促使DNA发生NHEJ
( nonhomologous end-joining)导致的基因缺失或同源重组,实现基因敲除。
Cas9对DNA切割示意图:
2、Cas9Nicknase蛋白
Cas9Nicknase是Cas9蛋白的D10A突变体,切割DNA单链。由于DNA上的Nick缺口会很快被细胞修复,一般不会造成基因突变。Cas9Nicknase需要成对的gRNA辅助才能实现DNA双链断裂。
采用Nicknase蛋白可以提高基因敲除的特异性,但是对gRNA的设计要求较高。敲除效率也比Cas9蛋白低一些。
简单地说,Cas9基因敲除效率更高,操作更容易;Cas9Nicknase特异性更高。您可以根据实验设计需要进行选择。
Cas9Nicknase对DNA切割示意图:
我公司CRISPR/Cas9系统产品简介
Cas9/gRNA基因敲除-质粒转染表达系统包括表达Cas9蛋白pCas9/gRNA1和表达Cas9Nicknase的pCas9/gRNA3载体。两个载体都可以同时表达gRNA。您可以根据靶基因的序列设计靶点,构建针对靶基因的pCas9/gRNA载体,转染细胞后pCas9/gRNA载体会对基因靶点进行定点切割,实现基因敲除或重组。
pCas9/gRNA1和pCas9/gRNA3载体通过直接转染细胞发挥作用。建议先进行细胞转染实验,转染效率高的细胞株可以采用该系统进行基因敲除。
Cas9/gRNA基因敲除-慢病毒表达系统
该系统采用慢病毒表达Cas9蛋白,可以构建稳定表达Cas9或者Cas9Nicknase蛋白的细胞系。再在该细胞系的基础上进行基因敲除。适合用于在需要一种细胞系中构建多个基因敲除的实验。由于Cas9蛋白稳定表达,该系统的基因敲除效率明显高于质粒转染系统。此外,Cas9蛋白稳定表达后,只需导入小分子的gRNA就能实现基因敲除功能,gRNA的导入可以根据细胞特性采用质粒转染、人工合成gRNA转染、AAV病毒或者腺病毒导入等多种方式。实验设计更加灵活。
CRISPR/Cas9基因敲除实例
pCas9/gRNA1基因敲除载体对照实验 pCas9/gRNA3基因敲除载体对照实验 Cas9蛋白稳定表达细胞系293T-Cas9对照实验 用pCas9/gRNA1载体敲除293T细胞中的TP53基因
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- 慢病毒载体pLV-EF1a-EGFP-C品牌:英茂盛业
- 慢病毒载体 pLV-EF1a-EYFP-N品牌:英茂盛业
- 慢病毒载体 pLV-EF1a-ECFP-N品牌:英茂盛业
- pLV-Flag C2
- 标签蛋白慢病毒载体pLV-Flag C1品牌:英茂盛业
- 慢病毒Cas9表达体系品牌:英茂盛业
- Cas9蛋白稳定表达细胞系品牌:英茂盛业
- CRISPR Cas9基因敲除载体构建服务品牌:英茂盛业
- 基因敲除细胞系构建服务品牌:英茂盛业
- TALEN表达质粒品牌:英茂盛业