黄曲霉毒素检测方法 生物生化试剂

黄曲霉毒素总量（aft）elisa检测试剂盒产品简介：

一、概要

黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。而使用黄曲霉毒素总量elisa试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素残留。

黄曲霉毒素总量检测试剂盒是应用elisa技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间35~40min，能Zui大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理

黄曲霉毒素总量检测试剂盒采用间接竞争elisa方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化tmb底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

三、适用范围

黄曲霉毒素总量检测试剂盒可定性、定量检测玉米、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素。

四、交叉反应率

黄曲霉毒素b2……………………………………………

黄曲霉毒素b1…………………………………………97%

黄曲霉毒素g1…………………………………………98%

黄曲霉毒素g2…………………………………………101%

五、检测步骤

测定前应须知：

1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、在elisa分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是elisa测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

5、黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。

操作步骤：

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。

3、洗涤工作液在使用前也需回温。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、加标准品/样本：加标准品/样本30ml到对应的微孔中，再加入黄曲霉毒素总量酶标物70ml/孔，Zui后加入黄曲霉毒素总量抗试剂50ml/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应20min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

7、显色：加入底物液a液75ml/孔，再加底物液b液75ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min~20min。

8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔od值。(若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。

六、检测方法灵敏度、准确度、精密度

试剂盒灵敏度：0.1ppb

回收率：

花生：95±15%

饲料：85±15%

玉米：90±15%

食用油：95±15%

精密度：

试剂盒的变异系数均小于10%

七、注意事项

1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的od值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、每加一种试剂前需将其摇匀。

4、反应终止液为2m硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6、储存条件

保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、试剂变质的迹象

发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（a450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8、在加入底物液a液和底物液b液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长），但不得超过30min。反之，则减短反应时间。

9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。

10、该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

八、贮藏条件及保存期

贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。

保存期：该产品有效期为12个月。