变性 DNA 过滤吸附柱

在plasmid dna提取中,往往会有少量genomic dna一同被提取出来. plasmid dna与genomic dna对柱子(无论离子交换柱还是硅胶膜柱)的吸附特性都相同.很难分离.
为了制备更纯的plasmid dna,需要在上柱之前对样品进行必要的处理.有2种可行的途径:1,加入特异性dna外切酶,降解所有有自由末端的dna,包括genomic dna和开环的plasmid dna. qiagen和novagen在附加值很高的大构件提取kit中使用的是这种方法.造价比较高.所以他们在其他系列kit 中一般不谈这个问题.
伦敦大学的学者做了对比实验.分别使用3种方法提取plasmid dna,分别是a:用qiagen公司的qiafilter plasmid mega kit; b:用普通kit加滤布滤纸法;c:用普通kit加filter-ez法. 然后将产物在一块胶上电泳并转膜做southern blot.探针是对宿主genomic dna特异性的.对杂交信号强度扫描结果显示: a:b:c=1:0.24:0.07. 结果表明filter-ez柱法可以降低genomic dna背景到1/14.

0.7mlspin,3000元/1000个;5000元/2000个;
22mlspin,3000元/100个; 5000元/200个

小注射柱,外型似1ml 塑料注射器,配10ml塑料注射器使用;每次上样量 0.8毫升;

600元/ 20套(Zui小零售单位), 1100元/ 50套, 5500元/ 500套,

2,中注射柱,外型似2.5ml 塑料注射器,配10ml塑料注射器使用;每次上样量2毫升;

700元/ 20套(Zui小零售单位),1300元/ 50套, 6000元/ 500套,

3,大注射柱,外型似10ml 塑料注射器,配10ml塑料注射器使用;每次上样量9.8毫升;

800元/ 20套(Zui小零售单位),1600元/50套, 6500元/ 500套.

5,96孔层析柱,axygen,配96深孔板使用,每孔上样量1200微升.

1200元/10套

注射柱的使用:注射器的底部有厚过滤膜,顶部设置了针头底座,可以允许另一只注射器插入.这样,使用一个注射器可以作为加样器同时也可以加压,提高层析流速.