碱性磷酸酶检测机构

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碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同工酶。已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与AKP6六种同功酶。其中第1、2、6种均来自肝脏，第3种来自骨细胞，第4种产生于胎盘及癌细胞，而第5种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。

关于碱性磷酸酶，北京清析技术研究院可提供活性检测，波长检测，基因检测，效价检测，化学发光检测，表达水平检测，化学发光检测，半定量检测等检测项目。同时，北京清析技术研究院可对血液碱性磷酸酶，骨源碱性磷酸酶，小鼠组织内源碱性磷酸酶，血清碱性磷酸酶，土壤碱性磷酸酶，猪肝碱性磷酸酶，细胞碱性磷酸酶等进行检测。

检测方法

1、Gomori钙钴法

ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。步骤：

（1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，待细胞长满玻片后取出。

（2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。

（3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。

（4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。

（5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。

结果：胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。

2、PNPP偶氮法

步骤

（1）用吸管吸掉96孔板内的培养液，用PBS冲洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺，1mmol/L氯化镁和6.7mmol/L PNPP的反应液。

（2）每孔150ul.37℃避光放置半小时,然后加0.1mol/L氢氧化钠100ul终止反应,用酶标仪于405nm波长下测定OD值.

（3）样品OD值在ALP标准曲线上读取酶活性值(U/L).

ALP标准曲线绘制:

取PNP0.0111克用三蒸水溶解后稀释至250ml,此时PNP的浓度为320umol/L.依次稀释到160 umol/L，80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相当于ALP1280 U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶标仪于405nm波长下测定PNP的OD值.以ALP活性值作为自变量,对应的OD值作为应变量,求得直线回归方程.

检测标准

1、WST 351:2011 碱性磷酸酶

2、ISO 3356:2009 奶.碱性磷酸酶的测定

3、ISO 3356:2009|IDF 63:2009 奶 碱性磷酸酶的测定

4、NF ISO 3356:2009 牛奶碱性磷酸酶的测定

5、NT 14.41-1983 检验牛奶中的碱性磷酸酶

6、DIN 10337:1993-12 牛奶中碱性磷酸酶活性的测定；酶法

7、YY/T 1234-2014 碱性磷酸酶测定试剂(盒)(NPP底物-AMP缓冲液法)

8、WS/T 351-2011 碱性磷酸酶（ALP）催化活性浓度测定参考方法

9、NY/T 3799-2020 生乳及其制品中碱性磷酸酶活性的测定 发光法

10、T/TDSTIA 008-2019 巴氏杀菌乳中碱性磷酸酶活性的测定 发光法

11、ISO/TS 4985:2023 乳和乳制品碱性磷酸酶活性的测定荧光微板法