武汉饲料用植酸酶活性检测 蛋白酶活性检测

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植物酶可以提高动物的消化功能，催化机体内的生化反应，促进机体的新陈代谢，从而弥补因应激等原因消化酶分泌的减少。所以很多时候，类似植酸酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶、果胶酶、淀粉酶等植物酶制剂会被作为很好的饲料添加剂，应用在饲料产品的生产加工里面。这时候，如果企业能够准确的把握酶活性、酶反应的相关数据就能够更好的设计一款符合市场需求的畜禽饲料。

植物酶活性的检测可以使用分光光度法进行测定，这一点，可以依据我国国家标准GB/T 18634-2009《饲用植酸酶活性的测定 分光光度法》来进行测定。通过实验室分析手段来进行评价， 我们可以用来筛选酶制剂的优劣，了解植物酶的最适反应温度、最适反应pH,pH的稳定性、底物的浓度对酶活性检测的影响等数据，从而完全反映添加植物酶后饲料的真实使用效果。所以，本次检测方案基本参考GB/T 18634-2009给出的方法。

一、方法原理分析

使用分光光度法检测植酸酶活性，原理主要是利用植酸酶在一定温度和 pH 条件下，可以水解底物植酸钠，从而生成正磷酸和肌醇衍生物，只要在酸性溶液中，用钒钼酸氨处理，就会生成黄色的【（ NH4） 3PO 4 NH 4 VO 3 · 16M O O 3 】复合物，然后我们用分光光度计，在波长 415nm 下进行比色测定就可以了解其酶活性。

二、检测方法步骤

1.取有代表性样品， 用四分法将试样缩分至200g， 植酸酶产品不需粉碎， 配合饲料和添加剂预混合饲料需粉碎通过0.45mm标准筛,装入密封容器,防止试样成分变化。

2.称取样品5000U/g的0.4~0.6g，精确至0.0001g，置于250mL三角瓶中，准确加入100mL乙酸缓冲液（2），放到空气浴摇床上振荡30min或磁力搅拌器上高速搅拌30min，在离心机上以4000r/min离心10min。分取不同体积的上清液用乙酸缓冲液（2）稀释，使样液浓度保持在0.4U/mL左右，待反应。建议精确移取上清液1mL至25mL容量瓶中，用乙酸缓冲液（2）定容，摇匀。再继续精确移取1mL试液至25mL容量瓶中，定容，摇匀，稀释至31250倍。

3.取10mL试管，精确移取2mL稀释液至试管中，同时做试样空白。将样品放入37℃水浴锅预热5min，先将空白加4mL终止液（1.3.7），再将样与空白依次加入4mL底物植酸钠（1.3.3），从加底物开始，向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致，加液后立即混匀，将其放入37℃水浴水解30min；取出后将样品各加入4mL终止液。

4.反应后的试样在室温下静置10min，如出现混浊需在离心机（1.4.7）上以4000转/min离心10min，上清液以标准曲线的空白调零在分光光度计415nm波长处测定样品空白（A0）和样品溶液（A）的吸光值，A-A0为实测吸光值，用直线回归方程计算植酸酶的活性。