产品名称 | 武汉纽斯特生物 Rac1 kit |
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公司名称 | 武汉纽斯特生物技术有限公司 |
价格 | 面议 |
规格参数 | |
公司地址 | 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B3-3栋3楼 |
联系电话 | 15002729010 15002729010 |
Gα13活化试验。MEF细胞分别用LPA(第2道)或不加LPA(1道)处理。细胞裂解物用抗活性Gα13单克l隆抗l体(Cat)孵育。#26902)(顶面板)。这个用抗Gα13兔多克l隆抗l体(Cat)免l疫印迹法检测沉淀活性Gα13#21005年)。底部的面板显示了用抗Gα13的细胞裂解物的Western blot(5%在顶部面板中使用的)。
Arf6激l活测定。 经GDP(lane1)或GTPγS(lane 2)处理后,纯化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意:体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10%,而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90%。
1,将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Arf 6蛋白)。
2,向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(终浓度为20 mM)。
3,将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4,在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。
5,在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6,通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM,终浓度)来停止加载。