| 产品名称 | Gα13 GTP 武汉纽斯特公司 |
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| 公司名称 | 武汉纽斯特生物技术有限公司 |
| 价格 | 面议 |
| 规格参数 | |
| 公司地址 | 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B3-3栋3楼 |
| 联系电话 | 15002729010 15002729010 |
试剂盒成分
特异性识别Cdc42活性构象的鼠单克l隆抗l体（Anti-active Cdc42， Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的叠氮l化钠。此抗l体可以特异性识别所有脊椎动物中的Cdc42-GTP。
Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管装—400ul包含200ul Protein A/G agarose 和200ul 20%乙醇溶液。（使用时溶液需要充分混匀，再吸取）
5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶装—30mL包含250 mM Tris-HCl (pH 8.0)， 750 mM NaCl， 50 mM MgCl2， 5 mM EDTA， 5% Triton X-100。
特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（Anti-Cdc42， Rabbit Polyclonal Antibody (Catalog No.21010)）：小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH 7.4）并包含有 50%的甘油。
100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管装—100ul (10 mM) ，实验中0.5mL细胞裂解液使用 5ul GTPγS标记。
100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管装—100ul (100 mM) ，Gα13-GTP，实验中0.5mL细胞裂解液使用5ul GDP标记。
目前还没有直接测定Arl1-gtpase活性的方法。NewEast Biosciences Arl1激l活检测试剂盒是基于特定构型的单克l隆抗l体特异性识别Arl1 GTP，但不识别Arl1 GDP的抗l体。鉴于克l隆抗l体对其抗原，活化试验可在短时间内进行。这个分析结果可靠，重现性一致。
电泳和转膜
1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。
2. 按照制造商的说明进行SDS-PAGE。
3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到PVDF或硝化纤l维素膜。
免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌）
1. 将PVDF膜浸入100%甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。
注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。
2. 封闭：用TBST缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%BSA在室温下孵育1H进行封闭，并需要恒定振荡。
3. 孵育一抗：用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA稀释特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的Cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°C条件下过夜孵育。
4. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。
5. 孵育二抗：（例如羊抗兔IgG-HRP），用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。
6. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。
7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ECL显色法。
