Rac1 kit 武汉纽斯特公司

产品详情

电泳和转膜

1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。

2. 按照制造商的说明进行SDS-PAGE。

3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到PVDF或硝化纤l维素膜。

免l疫印迹反应和检测（所有步骤都是在室温下进行，并不断搅拌）

1. 将PVDF膜浸入100%甲l醇15s，然后在室温放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纤l维素膜，此步省略。

2. 封闭：用TBST缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%BSA在室温下孵育1H进行封闭，并需要恒定振荡。

3. 孵育一抗：用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA稀释特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（稀释比例为1:50-1:1000，主要根据样品中含有的Cdc42蛋白的量），室温下孵育1-2小时，或者4°C条件下过夜孵育。

4. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。

5. 孵育二抗：（例如羊抗兔IgG-HRP），用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA按1:1000稀释比例稀释后使用，室温下孵育1小时并恒定振荡。

6. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。

7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ECL显色法。

Arl3（类似Arf的3）是一种ADP-核糖基化因子（Arf）家族蛋白，在N端延伸方面不同于大多数Arf家族成员。 Arl3的核苷酸交换是快速的，Rac1 kit，并且与脂质和去污剂无关。 与GDT / GTP结合后，Arl3与一系列效应蛋白相互作用，并调节这些效应蛋白的活性，例如人类视网l膜基因4（HRG4），cGMP磷酸二酯酶的δ亚基（PDEδ）和Arl2的结合物（BART）。 Arl3还以可调节的方式结合微管，以通过与色素性视网l膜炎2（RP2）相互作用来改变胞质分裂的特定方面。 有人提出，RP2与Arl3协同作用，将光感受器中的细胞膜和细胞骨架连接为细胞的一部分

9.收集上清液并在冰上存储样品（约1-2 mg总蛋白）以进行中间使用，或将其冷冻并保存在-70°C下以备将来使用。

储存条件

试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°C条件下保存。

试剂（试剂盒内不提供，由实验者自行配置）

1.  刺激和未刺激的细胞裂解物；

2.  蛋白酶抑制l剂；

3.  4 °C 摇杆或者摇床；

4.  0.5 M EDTA (pH 8.0)；

5.  1 M MgCl2；

6.  2X reducing SDS-PAGE sample buffer；

7.  电泳和免l疫印迹相关试剂；

8.  免l疫印迹缓冲液TBST (10 mM Tris-HCl， pH 7.4， 0.15 M NaCl， 0.05%

Tween-20)；

9.  免l疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA)；

10. PVDF或硝l酸纤维素膜；

11.  二抗；

12.  ECL 检测试剂；