明皓生物环肽合成

这是环状多肽的Zui常用和Zui简单的构型，比较经典的代表是奥曲肽．                           　　

这条人工合成的环八肽，八个组成氨基酸中有两个Cys，作用就是为了把这条多肽环上，从而暴露其活性中心．奥曲肽具有与天然内源性生长抑素类似的作用，但作用较强且持久，半衰期较天然抑素长30倍．

2  两对二硫键以上同分子内成环的多肽

生物体中很多起关键作用的蛋白空间结构往往都很复杂，大多是由两对以上的二硫键拉动形成的专有生物活性，对于大的蛋白通过体外原核克隆表达得到的许多细胞因子的包涵体（如集落刺激因子CSF），都是先经过变性，再复性从而得到部分正确空间构相产物，正确构相产物比例的高低直接关系到产品生物活性的大小．

对于小的肽类分子可以通过选择性保护，分步切割和氧化的方法来实现．常用的选择性保护有Cys(Acm), Cys(tBu),Cys(Mob)等等.但是由于每步氧化后都要经过一次HPLC纯化,Zui后的收率非常低,所以生产成本极大.

对于需求量比较大的产品,比如齐考诺肽(Ziconotide, CKGKGKCSRLMYDCCTGSCRSGKC-NH2  C1-C16, C8-C20, C15-C25),也可以考虑通过先合成线性多肽,再应用蛋白复性原理,以少量标准为参照,找到一种能实现目标产物富集的复性条件,Zui后通过HPLC纯化收集下来.齐考诺肽是一种新型具有明确的镇痛作用的多肽药物,2005年通过FDA批准.

二硫键的正确搭配是这类产品成功与否的关键,验证方法一般为胰蛋白酶(Trypsin)水解产物MS分析法.由于Trypsin能够特异地水解Lys和Arg,保留原来的二硫键,因此Zui后得到的正确产物的水解片段应该是有一定特异性的.

3  相同序列的分子间氧化

这个氧化过程非常容易实现,只要在高浓度下,调节pH到碱性,并保持一个氧化环境就可以快速发生,只是Zui后产物(二聚体)需要通过HPLC分离出来.这类产品在Zui后的MS确认上有一个特征峰,即奇数电荷分子量m/Z.这个特征峰的出现是判断收集的产物是否为二聚体的关键性标志.

4  不同序列的分子间氧化

这包括一般线性序列的分子间氧化和环状多肽的分子间氧化

5  多肽分子首尾酰胺成环

常见的有小的环二肽和环RGD五肽.

6  多肽分子内侧链酰胺成环

这包括多肽序列中间侧链羧基和N端氨基形成的酰胺环,侧链氨基和C端羧基形成的酰胺环以及侧链氨基和侧链羧基形成的酰胺环.比如美拉诺坦II(MT-II)就是一类通过侧链氨基与侧链羧基成环的七肽.             

7  内酯键成环

为了降低多肽在体内的降解速度,模拟某些自然界中的抗菌肽,还有人设计出了Lactone和Thioester(硫酯)成环的结构.

 总之,为达到充分暴露多肽活性中心的目的,形成环肽的手段和途径可以多种多样

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