环丙沙星快速检测试剂盒

样品制备：

牛奶不需要处理；肉、鱼、虾等需均质、提取、离心、稀释。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。Zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶浓度为500 ng/ml，以样品稀释液做系列倍比稀释，分别稀释500 ng/ml，250 ng/ml， 125 ng/ml，62.5 ng/ml，31.2 ng/ml，15.6 ng/ml，7.8 ng/ml。样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml。

辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔50ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物加990ul辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.         加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，然后在所有孔中加入50 ul辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物工作液。尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟-1小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.         温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。

3.         依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

4.         依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

5.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

注：

1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是Zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。