乙型脑炎（EEB）病毒IgM 抗体检测试剂盒

流行性乙型脑炎（EEB）病毒IgM 抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使  用  说  明（96T/48T）

[原理]

流行性乙型脑炎是由嗜神经的乙脑病毒所致的中枢神经系统性传染病。经蚊等吸血昆虫传播，流行于夏秋季，多发生于儿童，临床上以高热、意识障碍、惊厥、呼吸衰竭及脑膜刺激征为特征。部分患者留有严重后遗症，重症患者病死率较高。

本试剂盒采用间接ELISA法，以纯化流行性乙型脑炎病毒抗原包被，配以抗人IgM单克隆抗体酶结合物等试剂组成。本试剂盒操作快速、简便，取微量全血即可检测，适用于计划免疫效果监测和人群抗体水平调查。

[试剂盒组成]

1、生物素化EEB抗原预包被板  1块（8X12/4X12）

2、阴性对照                  1瓶

3、阳性对照                  1瓶

4、标本稀释液           1瓶（22/11 ml，直接使用）

5、酶结合物             1瓶（12/5ml，直接使用）

6、30X浓缩洗液              

1瓶（20/10ml，加蒸馏水1：30稀释使用）

7、显示剂A、B液            各1瓶（5/3ml）

8、终止液（2M H2SO4）       1瓶（5/3ml）

9、说明书                    1份

[操作步骤]

1、样本稀释：用标本稀释液以1：41（5ul—200ul）稀释标本，混匀后置37℃20分钟。

2、加样：小心吸取已稀释待检标本上清液100ul于反应孔中，设阴、阳性对照（各100ul）及空白对照（加100ul标本稀释液）各一孔。轻拍混匀。37℃温育30分钟。甩去孔内液体，用洗涤液洗板3次并在吸水纸上拍干。

3、加酶结合物：每孔2滴，混匀后置37℃温育30分钟。同上法洗涤3次并拍干。

4、 显色：每孔加显色剂A、B各一滴，轻拍混匀（或震荡器混匀）后置37℃10分钟。

[结果判断]

1. 目测：在白色背景下观察各孔显色情况，兰色者为阳性，无色者为阴性。

2. 酶标仪测定：每孔加终止液1滴（或50ul），混匀后在450nm下测定各孔O.D值。

S/N=标本O.D值/ 阴性对照O.D值。        

S/N≥2.1为阳性；

1.5≤S/N<2.1为可疑标本; S/N<1.5为阴性。

④ 阴性对照(NC)小于0.10时以0.10计, 大于0.1小于0.21时以实际O.D值计算;若大于0.21时,实验可能出现了较大误差,需重复实验。

⑤ 阳性对照(PC)值通常≥0.4,实验成立,否则需重做。

[注意事项]

1. 微孔板须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用，余者封存置2-8℃。

2. 滴加试剂前应将液体翻转数次混匀，滴加时保持瓶身垂直。

3. 洗涤时每孔均须加满，防止孔内有游离酶不能洗净。

4. 试剂置2-8℃存放，不能冻结，有效期10个月。

5. 避免用溶血、混浊或脂血标本。

6. **用新鲜标本，如需保存，可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周（样本应避光）。