五味子油，超临界提取，北五味子澄清油类

一、超临界提取五味子油，经过特殊过滤，澄清的油状液体，五味子乙素含量达到3%。

二、五味子油质量标准：

四、五味子油生产设备照片

五、五味子油提取工艺：　五味子为木兰科植物五味子(schisandra chinesnsis ( turcz. )
baill. ) 的干燥成熟果实,收载于《中国药典》2000年版,俗称北
五味子。北五味子是生长于中国东北,遍布小兴安岭、伊春、桃
山、延边等地的一种道地药材,对神经系统、心血管系统、消化系
统等具有多种药理作用。现代研究证明,五味子生物活性成分主
要是木脂素和挥发油、木脂体等[ 1 ]。
北五味子活性成分的提取研究主要是采用水提、乙醇回流提
取和渗漉提取法等[2, 3 ]。这些方法提取时间长、活性成分提取率
低。超临界流体萃取技术的研究表明,超临界流体萃取应用于天
然产物的提取具有选择性高、操作时间短、有效成分得率高、流程
简单、能耗低、过程无有机溶剂残留等优点。本文以五味子超临界
流体萃取法的总提取物出率及其五味子甲素、乙素、总木质素为指
标,与五味子乙醇回流提取法和乙醇渗漉提取法进行了对比研究。
1　仪器与试药
722型光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂) ; scl—
10avp型高效液相色谱仪; spd—10avp紫外检测器(日本岛津
公司) ; tg328b型分析天平(上海上平仪器公司) 。tc - sfe -
50 - 5 - 120s型超临界流体仪(沈阳天诚) 。
北五味子药材采收于吉林省汪清县;五味子甲素对照品(批
号0764 - 200107,中国药品生物制品检定所) 、五味子乙素对照
品(批号110765 - 200205,中国药品生物制品检定所) ;色谱纯甲
醇,水为双蒸水,其余均为分析纯试剂。
2　方法与结果
2. 1　提取液的制备
2. 1. 1　乙醇回流提取法取五味子300 g加生药量6倍的95%
乙醇,加热回流提取2次, 3 h /次,过滤,合并提取液,滤液减压回
收乙醇浓缩成浸膏,计算出膏率。结果见表1。
2. 1. 2　乙醇渗漉提取法取五味子300 g加95%乙醇浸泡24 h后
进行渗漉提取,以10 ml /min的流速,共接收生药量10倍体积的渗
漉液,渗漉液减压回收乙醇浓缩成浸膏,计算出膏率,结果见表1。
2. 1. 3　超临界流体萃取法[ 4 ] 取五味子300 g,粉碎后过40目
筛,均匀添满提取罐,萃取时间为3 h,萃取压力为21mpa,温度
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时珍国医国药2007年第18卷第5期l ish izhen med icine and mater ia med ica research 2007 vol. 18 no. 5　
37℃, co2 流量为5 l /min。出膏率结果见表1。
2. 2　五味子总木脂素的测定方法[ 5 ]
2. 2. 1　标准曲线的制备精密称取五味子乙素对照品7. 5 mg,
置于1. 0 ml量瓶中,加氯仿溶解定容,分别吸取2, 4, 6, 8, 10, 12,
14, 16μl注入20 ml试管中,以6μl氯仿为空白,挥去氯仿,依次
加入10%变色酸水溶液0. 5 ml,浓硫酸3. 0 ml,蒸馏水1. 5 ml,摇
匀,在沸水中加热30 min,溶液呈紫红色,取出冷却,在570 nm处
测定吸收度,回归方程: a = 1. 32 ×10 - 3 c + 3. 52 ×10 - 3 ; r =
0. 999 2。五味子乙素在15～120μg之间有良好的线性关系。
2. 2. 2　样品的总木脂素含量测定分别取乙醇回流提取物、乙醇
渗漉提取物以及超临界流体萃取物,精密称取1 g,加氯仿20 ml
溶解,定量转移至50 ml量瓶中,加氯仿释至刻度。精密吸取0. 2
ml,同对照品项下操作。测定吸收度,以五味子乙素的标准曲线
计算总木脂素的含量,结果见表1。
2. 3　五味子甲素、乙素hplc含量测定[ 6 ]
2. 3. 1　色谱条件及系统适用性实验色谱柱: ymc - pack ods
柱(250 mm ×4. 6 mm, 5μm) ;柱温: 40℃;流动相:甲醇- 水(70
∶30) ;体积流量: 0. 6 ml/min;检测波长: 254 nm。在选定条件
下,五味子甲素峰、乙素峰和样品中其他组分色谱峰可达基线分
离,且与其他相邻色谱峰分离度大于1. 5,分别按五味子甲素和
乙素峰计算,理论板数均在5 000以上。色谱图见图1～3。
2. 3. 2　对照品溶液的制备精密称取五味子甲素、五味子乙素对
照品各10mg,分别置10 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇
匀,微孔滤膜(φ0. 45μm)过滤,即得。
2. 3. 3　供试品溶液的制备精密称取3种不同方法提取的浸膏
各1 g,置50ml量瓶中,加甲醇适量,超声处理30 min,加甲醇稀
释至刻度,摇匀。微孔滤膜(φ0. 45μm)过滤,即得。
2. 3. 4　五味子甲素、乙素线性关系的考察精密吸取五味子甲
素、乙素对照品溶液(1 mg/ml) 2. 5, 5. 0, 7. 5, 10, 12. 5, 15μl,依
次注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。分别以峰
面积积分值为纵坐标,五味子甲素、乙素进样量为横坐标,绘制标
准曲线,并计算回归方程,结果显示五味子甲素进样量在2. 5～
15μg范围内,有较好的线性, y = 1. 426 95 ×105 x + 1. 393 13 ×
105 , r = 0. 999 85。五味子乙素进样量在2. 5～15μg 范围内, 有
较好的线性, y = 5. 460 67 ×105 x - 1. 2610 ×104 , r = 0. 999 9。
2. 3. 5　精密度实验精密吸取同1份供试品溶液10μl,重复进
样5次,测定五味子甲素峰面积积分值,得rsd = 1. 05%;测定五
味子乙素峰面积积分值,得rsd = 1. 18%。
2. 3. 6　重现性实验对同一样品,制备供试品溶液,平行制备5
份,进样,测定五味子甲素峰面积积分值, rsd = 1. 63%;测定五
味子乙素峰面积积分值, rsd = 1. 49%。
2. 3. 7　稳定性实验精密吸取同1份供试品溶液10μl,于0, 2,
4, 6, 8, 10, 12 h进样,测定五味子甲素、乙素峰面积积分值, rsd
分别为1. 57% , 1. 31% ( n = 7) 。结果表明:供试品溶液在12 h内
基本稳定。
2. 3. 8　加样回收率实验各取已知含量的3种样品中加入五味
子甲素、乙素对照品一定量,按供试品预处理方法并测定结果,五
味子甲素平均回收率95. 5% , rsd为2. 10% ,五味子乙素平均回
收率97%, rsd为1. 49%。
2. 3. 9　供试品测定取不同提取方法提取的3种样品各精密称
定1g,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,吸取5～10μl,按2. 1
项下操作进样测定。结果见表1。
表1　不同提取工艺测定结果
提取方法
浸膏
m /g
总木脂素
(%)
五味子甲素
(% )
五味子乙素
(%)
回流提取35. 7 7. 23 1. 296 1. 183
渗漉提取37. 3 10. 95 1. 795 1. 269
超临界流体萃取38. 4 12. 71 1. 927 1. 311
图1　五味子供试品色谱图　　　　　　　　　图2　五味子甲素色谱图　　　　　　　　　图3　五味子乙素色谱图
3　结果与讨论
3. 1　超临界流体萃取北五味子活性成分工艺条件为:萃取
压力21mpa,温度37℃, co2 流量5 l·min- 1。
3. 2　超临界流体萃取法与乙醇回流和乙醇渗滤提取法相比,没
有有机溶剂残留,大大简化工艺;避免较长时间加热等因素对有
效成分造成的损失;且具有提取设备简单、操作容易、有效成分提
取率高、含杂质少等特点。该工艺为工业生产建立了理论性基
础,具有实际的指导意义。
3. 3　根据实验数据分析,超临界流体萃取浸膏量与乙醇渗滤法
和乙醇回流法无明显差异,但是总木脂素含量与五味子乙素、甲
素含量明显高于渗滤和回流提取法。
3. 4　参考《中国药典》2005年版五味子及南五味子项下,本实
验hplc的测定波长选定为254 nm。对流动相的系统组成和比
例进行了研究比较,采用了甲醇- 水,乙腈- 水- 醋酸等系统,根
据分离情况,选择甲醇- 水(70∶30)较适宜,分离度达到1. 5以
上。建立hplc法可以在同动相同一波长下同时测定五味
子甲素、乙素。
参考文献:
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