大鼠酸性成纤维细胞生长因子1ELISA试剂盒

更新时间：2015-10-15 17:14:11 信息编号：3710175 发布者IP：112.65.1.68 浏览：36次

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大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒

酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，简称 ELISA，是用于检测体液中微量物质的固相免疫测定方法。它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic

techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。Zui初是在1971年由瑞典学者Engvail和Perlmann，荷兰学者Van Weerman和Schuurs报道的一项新成果。ELISA现在已成为目前分析化学领域

中的前沿课题。

大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒仪器和材料

1. 聚苯乙烯微量细胞培养板（平板, 40, 96孔）。

2. 酶联免疫检测仪

3. 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀释度1:1000。

4. 包被液:：0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液,4℃，保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸馏水稀释至100 ml。

5. 稀释液：0.01mol/LpH7.4 PBS－－Tween－－20, 4℃，保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween—20，0.5ml. 蒸馏水加至1000ml。

6. 洗涤液：同稀释液

7. 封闭液：0.5%鸡卵清蛋白，pH7.4 PBS。

8. 邻苯二胺溶液（底物）：临用前配制 0.1M 柠檬酸（2.1g/100ml）, 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O （7.163g/100ml） 6.4ml, 蒸馏水12.5ml, 邻苯二胺10mg, 溶解后, 临用前加30%H2O2 40 微升。

9. 终止液：2mol/LH2SO4。

大鼠酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。

1.试剂盒超过期，超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响

2.试剂、样品用前未平衡至室温

3.加入试剂的体积和时间有误，移液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁

4.洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力

5.孵育时间及孵育温度未达到要求，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整

6.洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求；洗涤冲击力太大。浸泡时间太长

7.显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入

8.底物作用时间不够

9.蒸馏水水质有问题

对策：

1.实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏。

2.从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。

3.确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应完全

4.确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染

5.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门，以免影响保温

6.严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数

7.显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂?A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入

8.准确定时

9.测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响

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