三聚氰胺ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的三聚氰胺和微孔条上预包被的偶联抗原竞争三聚氰胺抗体，加入酶标记物后，用底物显色，样本吸光值与其所含残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应三聚氰胺的含量。

 

试剂盒检测限：         10 ng/mL

 

1．预包被板：96T

2．标准品液：（1mL/瓶） 0 ng/mL、20 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL

3．酶标记物          12 mL

4．抗体工作液         7 mL

5．底物缓冲液         7 mL

6．底物液             7 mL

7．终止液             7 mL

8．20倍浓缩洗涤液    50 mL

 

称取89.5 g Na2HPO4·12H2O ，蒸馏水定容至1000 mL。

 

1．匀质样品到布丁状；

2．称取2 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液，并剧烈振荡；

3．超声萃取1 min，漩涡混合1 min，然后静止5 min，使样品分层；

4．5000 r/min室温离心5 min，用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将其收集于干净试管中；

5．用样品稀释液将滤液20倍稀释；

6．取50 μL进行实验。

 

1．均质干的宠物饲料样品；

2．称取1 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液，并剧烈振荡；

3．超声萃取1 min，漩涡混合1 min，然后静止5 min，使样品分层；

4．5000 r/min室温离心5 min，用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将萃取液收集于干净试管中；

6．用样品稀释液将滤液20倍稀释；

7．取50 μL进行实验。

 

 

1．  准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中，冷藏至4℃备用；

2．  将1 mL液态奶或乳饮料样品置于离心机中，5000 g离心10 min（建议10℃低温离心），分离样品中脂肪；

3．  弃上层脂肪，取0.2 mL离心后的脱脂液态奶或乳饮料试样于干净试管中；

4．  加入0.8 mL样品稀释液于离心后的脱脂液态奶或乳饮料中，振荡混匀样品，取50 μL进行实验。

1． 称取1 g奶粉样品于干净试管中；

2． 加入5 mL的45～50℃温水溶解奶粉并混匀后冷藏至4℃备用；

3． 取1 mL溶解好的奶粉试样于离心管中，5000 g离心10 min（建议10℃低温离心），弃上层脂肪，取0.2 mL试样于干净试管中；

4．加入0.8 mL样品稀释液于试管中，振荡混匀取50 μL进行实验。

1． 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中，将PH值调至6～8，冷藏至4℃备用；

2． 将1 mL样品置于离心机中，5000 g离心10 min（建议10℃低温离心），弃上层脂肪，取0.2 mL试样于干净试管中；

3． 加入0.8 mL样品稀释液于试管中，振荡混匀取50 μL进行实验。

直接法：将样品4℃冷藏30 min后，4000 r/min离心15 min，弃去上层脂肪，取50 μL进行实验。

 

1．将试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温（20～26℃）下平衡30min以上，将需用的板条放入支架，按顺序编号；

2．洗液配制：将50 mL浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水稀释至1000 mL备用（或按需量稀释）；

3．在标准品孔中加入50 μL标准品，样品孔加入50 μL待测样品，然后每孔加入50 μL抗体（加入标品和样品时无时间差的影响），轻拍混匀，37℃下孵育40 min；

4．倒出孔中的液体，用洗板机洗涤4～6遍；没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中，静置20 s，倒出孔中的液体，将微孔架倒置，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作4～6遍；

5．加入酶标记物100 μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min，取出重复洗板步骤；

6．显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，置37℃ 环境中反应10 min；

7．测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡混匀．设定酶标仪于450 nm处，测定每孔OD 值，根据标准曲线计算样品浓度。