【北京艾德莱】好的反转录酶 逆转录酶 RT-PCR MMLV Reverse Transcriptase

【北京艾德莱】的反转录酶、逆转录酶 RT-PCR MMLV Reverse Transcriptase 制品说明：本制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TUREscript Hˉ RTase。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。 适用范围：第一链cDNA合成。可用于低拷贝基因的检测。 特点：合成cDNA片段长度Zui高可达12 kb。 第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例) 1.加入 Components Volume Total RNA/mRNA 　　　　　　　　50 ng-5 μg/5-500 ng Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)or 　　　　　　　　　1 μl Random Primer(0.1 μg/μl) or 　　　　　　　　1 μl GSP(Gene Specific Primer) 　　　　　2 pmol dNTP Mixture (10 mM each) 　　　　　1 μl 5× RT Buffer 　　　　　　　　　　　　　　4 μl RNase Inhibitor(40 units/μl) 　　　　0.5 μl TUREscript Hˉ RTase 　　　　　　　　　1 μl RNase free H2O to final volume 　　　　20 μl 2. 轻轻混匀 如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育50min。 如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育50 min。 3.65℃加热15 min失活TUREscript Hˉ RTase。 RT-PCR 建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。 建议PCR条件(以50 μl反应体系为例) 注意事项: 1.避免RNase污染。 2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。 3.如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。